2000年周显欣从华西医科大学后，被分到了广州的一家制药厂，在学校就是文艺部长的她，实在受不了沉闷的气氛。刚好这个时候日本富士电视台在广州举行选美比赛，抱着试一试的态度去参加的她却捧回了冠军奖杯，并赴日本进行文化交流。回到广州后，周显欣辞掉了药厂的工作，开始专心向演艺方面发展：接拍广告，在电视台当主持人等，算是正式进入了演艺圈。同年，“弃医从艺”的周显欣考取中央戏剧学院表演系公费研究生继续攻读。

2002年在电视连续剧《誓言无声》中饰演女主角许婉云（该片获中国23届金鹰奖、飞天奖长篇电视剧一等奖）以及电影《铜鼓》女主角梅措（该片获CCTV-6电影频道“最佳民族电影”奖）。

2003年，在电影《都市没有地平线》中饰演女主角刘小宁（该片获中国大学生电影节“十佳数字电影”奖）；在改编自作家张恨水的长篇章回小说《满江红》的电视剧《红粉世家》中饰演女主角苏琪。

2005年主演电影《怪物》饰演陈丽一角崭露头角；同年，在电视剧《爱本无罪》里饰演吴依凡，凭借该剧获浙江省第十六届电视“牡丹奖”杰出演员奖；同年还主演了电影《儿女仙踪》。

2009年担任电影《高考1977》女主角陈琼真正走红，该片获第13届华表奖优秀故事片大奖和第18届金鸡奖上获得最佳编剧奖与最佳影片提名以及第五届中美电影节上获得“金天使”大奖。同年，在中国国内首部大型侦探悬疑推理剧《侦探小说》饰演女主角唐梦云。

2010年出演电影《河长》女主角成晨，电视连续剧《大盛魁》女主角孙香玉以及领衔主演话剧《意外来客》获得满堂彩，备受上海话剧迷们的青睐（该剧于2012年在上海巡回演出）。

2013年在金融谍战剧《金战》中饰演女主角罗天晴。在电视剧《婚姻时差》中饰赵晓菲、以及在同年9月份的都市情感喜剧《给幸福下订单》中饰演女主角柳悦。